李磊

青岛市妇女儿童医院 生殖中心医生 毕业于潍坊医学院 主要负责五楼实验室工作 擅长胚胎培养

冰宝宝出生会和正常孩子一样健康吗

作者|李磊

首先，答案是肯定的，冰宝宝出生会和正常孩子一样健康，冷冻胚胎和新鲜胚胎一样具有相同的分裂能力和发育潜能，冷冻胚胎可以完全正常的生长。 新闻记录 2015年青岛市妇女儿童医院生殖中心做了一例十年前冻存的胚胎复苏移植，取得成功，胚胎经过十年的冷冻保存，仍然具备完全正常的着床能力和发育能力。国内各大媒体对我们医院做了专题报道。下面图片为部分媒体截图。 当然，新闻报道的只是我们成功的个例，大量的成功案例是没有报道的。

目前我们生殖中心胚胎冷冻的现状

前面说了这么多媒体的报道和科研工作者的研究，那么目前我们生殖中心的胚胎冷冻现状是什么呢，我想这个是大家更为关心的。

目前我们生殖中心充分利用现有的知识和理论体系，结合医学界研究现状，努力使胚胎冷冻技术走在国内的前沿，不断改进和优化冷冻技术，使目前的冷冻胚胎复苏率得到了极大的提高，几乎所有的胚胎均可以正常复苏和用来移植。

胚胎冷冻的时机选择有两种

第一、选择发育至8细胞左右，发育天数为第三天的胚胎进行冷冻。这一时期称为分裂期，分裂期胚胎是目前最广泛采用的冷冻时机。

第二、选择发育至囊胚期，发育天数为第五天的胚胎进行冷冻。由于囊胚培养的筛选作用，只有优质的胚胎才能形成囊胚，囊胚种植率也是更高，可以减少胚胎移植的数量，能够准确的选择更优的胚胎移植。因此，囊胚冷冻也逐渐的占冷冻更大的比例，越来越多的人选择囊胚冷冻。

冷冻方法

目前在使用的冷冻方法有两种，缓慢冷冻法和快速冷冻法即玻璃化冷冻法。下面为大家简要介绍这两种方法。

一、缓慢冷冻法

缓慢冷冻法是使用时间最长的方法，将胚胎放入含有一定浓度冷冻保护剂的冷冻液中处理后，慢速降温（0.2-2.0℃/分钟）至一个较低的温度（-80至-35℃），在降温的过程中胚胎会继续脱水。缓慢冷冻法已经应用多年，技术成熟，效果稳定，广泛的应用于IVF中原核期到囊胚期胚胎的冷冻保存，IVF有关的试剂公司能够提供多种冷冻和复苏试剂盒。

冷冻基本原理：

1、脱水阶段，胚胎被放入含有一定浓度渗透性冷冻保护剂的冷冻液中。此时细胞外的渗透压较高，细胞内的水透过细胞膜流向细胞外，虽然此时渗透性冷冻保护剂也可以从高浓度的细胞外进入细胞内，但由于水的渗透速度更快，因此在刚进入冷冻液的开始阶段，随着水渗出细胞外，细胞体积因脱水而出现明显的皱缩。

2、恢复阶段：但随着时间的推移，细胞外的渗透性冷冻保护剂也逐渐进入细胞内，使细胞体积停止收缩，转而逐渐膨胀，直至恢复接近原来的大小。也就是细胞出现先变小再变大的现象。

3、进一步脱水：随后，通常将胚胎转移至含有非渗透性冷冻保护剂的冷冻液中进一步增加细胞外的渗透压，使细胞持续脱水，体积进一步减少，以利于在随后的冷冻过程中，尽量减少冰晶的形成。

4、程序化降温：平衡后的胚胎开始程序降温，当温度降到冷冻液的冰点以下时，需要进行植冰，诱导冰晶逐步形成，冰晶的形成，导致细胞外液体浓度增加，伴随着胚胎的进一步脱水，直到温度降到-80℃左右，进入液氮。

复苏基本原理：

主要包括复温和去除冷冻保护剂。

1、复温：复温通常采用较快的升温速度，升温速度过慢会导致细胞内小冰晶周围的水分聚集到小冰晶周围，使小冰晶形成大冰晶，这叫做重结晶现象，从而导致细胞出现致命损伤，当温度低于-120℃时，所有非冰晶的溶液部分仍处于玻璃化状态，不会出现重结晶现象，当温度超过之后，细小的冰晶就有可能发生重结晶。迅速升温的目的就是要快速通过-120至-35℃的较危险阶段。

2、去除冷冻保护剂：复温后的胚胎细胞，其细胞内仍然含有较高浓度的渗透性保护剂，如果直接将胚胎放入等渗的复苏液体中会因为细胞内含有大量的渗透性保护剂而吸入大量水分，导致细胞裂解，因此需要尽快去除冷冻保护剂，将胚胎先放入高渗透性的复苏液，使水分缓慢的与保护剂交换，用水分逐步替代保护剂渗透进入细胞，最后胚胎会恢复至正常的生理状态。

二、玻璃化冷冻法：

在自然界，有很多种在寒带生活的植物、昆虫和两栖动物能通过自然形成玻璃化的方式，在零度以下的环境中存活。北极蛙在冬季温度开始下降时，肝脏合成大量的甘油，使温度降至冰点以下后体内细胞处于玻璃化状态，仍然能够生存。玻璃化冷冻法就是从这些生物中来学习得来，用更高浓度的冷冻保护剂来替代细胞内的水分，使细胞快速降温，直接进入玻璃化状态。

冷冻基本原理：

玻璃化是液态的物质在一定的降温速率下，由液相直接转变成为一种玻璃状的固体状态的过程，内部没有晶体结构，对于保存胚胎的溶液来说，这种玻璃状态由于内部没有冰晶形成，能保持其细胞内溶液状态的分子及离子分布。同时由于没有冰晶形成，避免了冰晶对细胞的物理化学损伤，可以实现更好的冷冻效果。

其冷冻原理类似缓慢冷冻法，先将胚胎放入含有较低浓度冷冻保护剂的平衡溶液中平衡，使渗透性冷冻保护剂能够充分渗入细胞内，并使胚胎细胞逐步脱水，在此过程中，也能看到细胞体积从缩小到重新扩大的变化。然后将胚胎置入含有较高浓度冷冻保护剂的溶液中，经较短时间的平衡后，将胚胎装入冷冻容器，投入液氮。 下面分别是2细胞期，6细胞期，囊胚期玻璃化冷冻后，囊胚期玻璃化冷冻复苏后胚胎的基本形态。

复苏基本原理：

复苏过程与缓慢冷冻法类似，采用较快的升温速度，升温速度过慢会发生重结晶。然后将胚胎放入含有一定浓度非渗透性保护剂的复苏液中，使渗透性保护剂逐步从细胞内渗出，水分逐渐进入细胞内，胚胎恢复正常的生理状体。

胚胎冷冻的优势：

1、避免浪费胚胎，增加IVF治疗的成功率。常规促排卵的周期中，由于得到的胚胎数通常大于移植的胚胎数，多余的胚胎进行冷冻保存，可以明显的降低下一个治疗周期的费用。

2、减少胚胎移植的数量，降低多胎妊娠的发生率。具备可靠的胚胎冷冻技术，才能使医生有信心减少胚胎移植的数目，避免胚胎的浪费。

3、预防严重卵巢过度刺激综合征的发生。由于妊娠可以明显加剧卵巢过度刺激综合征的严重程度和持续时间，对于IVF周期中移植日出现明显卵巢过度刺激倾向的患者，放弃移植新鲜胚胎，可以显著降低重度卵巢过度刺激的发生。

4、供卵。由于受卵者的月经周期很难与捐赠者生理周期同步，而且捐赠者可能也没有事先经过半年以上的传染病筛查，所以冷冻胚胎是供卵的通常选择。

5、其他原因导致的取消移植。体外受精过程中还可能存在一些无法预料或紧急的情况，比如：因宫颈暴露困难、狭窄、出血导致移植置管失败、患者出现个人原因、发热、子宫内膜过薄、息肉等情况，在移植日不能进行移植，可以先冷冻保存待以后移植。

6、保存生育功能。由于恶性肿瘤等疾病需要接受化疗或者放疗前，可以先选择冷冻胚胎，疾病治愈后在行复苏胚胎移植。缺点是胚胎冷冻仅适合于已婚女性，而且将来一旦发生婚姻变化，则这种胚胎的处理将带来复杂的伦理问题。

7、便于植入前遗传学诊断即PGD。PGD的活检材料通常为第三天的分裂期胚胎细胞或者是囊胚期的滋养层细胞，活检后采用何种技术进行诊断还取决于不育夫妇的问题，有些技术需要的时间较长，甚至超过2天，不利于胚胎移植。将活检后的胚胎冷冻保存则给PGD提供了充足的时间。